一般情况下在流动相中不保留的成分，出来的第一个峰就是死时间死亡时钟测试。因此，死体积=死时间X流量。

死时间( t0)是液相色谱中的重要参数，其值的精确测定对分离条件的优化和色谱热力学研究具有重要意义死亡时钟测试。在反相色谱中．固定相极性较弱．流动相一般为强极性的水、甲醇、乙腈等．故通常采用极性更强的NaNO3或NH4No3作为标记物，进行死时间的测定。但由于标记物与固定相之间，存在着一定的相互作用．因此测定结果会与真实死时间有一定的偏离。

通常以NaNO3等强极性溶质进行反相液相色谱中死时间测定时，其与固定相之问极弱的相互作用可以忽略不计死亡时钟测试。这种方法得到的死时间可以进一步用于色谱保留机理的热力学研究和分离条件的优化。

高效液相色谱中死时间是个非常重要的基础参数。在进行色谱条件优化及定性鉴定时都需要用到。

液相色谱中的基本理论与气相色谱相同，但液相色谱系统与气相色谱系统却有很大差别 如液体的扩散系数和料颗粒的孔体积，也包括填料颗粒间的孔隙体积．故影响死时间的因素也比气相色谱复杂得多。

在色谱中测定死时间通常有两种方法，一是用所谓的无保留的探测物如脲嘧啶、D2O、某些无机盐等直接测定；二是根据同系物的保留时间用数学方法进行计算求取死时间。

测定死时间最简单的方法：

液固色谱死时间：可用苯、四氯乙烯或KNO3水溶液作探针测死时间。

液液色谱死时间：反相用NaCI、NaNO3、HNO3、HCIO3、苯甲酸、苦味酸、尿嘧啶水溶液测死时间，但测量误差较大。正相用四氯乙烯、四氟乙烯测死时间。附文1)反向液相色谱中测定死时间的新方法2)反相高效液相色谱中死时间的测定